医学检验操作知识

来源:仕图医考      543      发布时间:2015-11-25

第一节   临床血液学检验

 

血常规检查

    【 标    本 】

    抗凝静脉血(有些仪器也可用末梢血)。

    【 方    法 】

    血液细胞自动分析仪测定法。

    【 试    剂 】

    血液细胞自动分析仪配套试剂。

    【 操    作 】

    详见自己实验室血液细胞自动分析仪使用手册。

    【 附    注 】

    1. 血常规包括白细胞计数及分类、红细胞计数、血红蛋白浓度、红细胞比积、血小板计数等项目。这些项目亦有相应的手工方法,详见有关资料。

    2. 半自动及全自动血液细胞分析仪从设计上均要求用抗凝静脉血。其优点为:

    (1)静脉血能正确地反映病人实际情况,重复性好;

    (2)利于延长仪器的使用寿命;

    (3)解决了采血盘的交叉感染问题等。

    3. 血细胞计数应用EDTA·K2:为抗凝剂(EDTA·K2·2 H2O 1.5~2.2mg可抗凝1ml血)。

    4. 贮血容器应选用有盖塑料管。抗凝血采集后在室温中贮存应不超过6h;如需制作血涂片应在2h内完成。

    5. 测定前必须将EDTA·K2抗凝血充分混匀。

    6. 血细胞分析仪测定最适温度为18~22℃,低于15℃或高于30℃,均可使细胞体积发生改变,影响各参数的结果。

7. 血细胞分析仪用于白细胞分类只能当作一种过筛手段,当白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板的任何一项有明显

 

升高或降低;白细胞分类出现异常结果(中间细胞群百分率≥8.0%);红细胞、白细胞和血小板的任何一个直方图出现异常图形等情况,须用显微镜检查及分类。

 

嗜酸性粒细胞直接计数

    【 标    本 】

    末梢血或抗凝静脉血。

    【 方    法 】

    直接计数法。

    【 试    剂 】

    1. Hinkelmann液;

    2. 乙醇- 伊红稀释液;

    3. 伊红- 丙酮稀释液。

    【 操    作 】

    1.小试管中加稀释液0.38ml。

    2.常法取末梢血20ul,加入管内混匀,待红细胞溶解后两侧充池。

    3.静置3~5min ,用低倍镜(必要时用高倍镜)镜下计数10个大方格内嗜酸性粒细胞数。总数×20×106=嗜酸性粒细胞/L。

    【 附    注 】

    1. 血液稀释后应于1 h 内计数完毕。

    2. 充池前要充分混匀,但又不宜用力过猛。

    3. 住院病人采集标本时间力求统一,以免受日间生理变化的影响。

 

红细胞沉降率测定

    【 标    本 】

    抗凝静脉血。

    【 方    法 】

    魏氏法。

    【 试    剂 】

    109mmol/L枸橼酸钠溶液。

    【 操    作 】

    1. 3mm×100mm试管1支,在2ml容量处刻上记号,加抗凝剂0.4ml。

    2. 静脉采血后,取下针头,加血至刻度,旋转混合。

    3. 用血沉管(300mm×2.5mm)吸取上述混匀血液至" 0 " 刻度处,拭去管外附着的血液,将管垂直立在血沉架上。

    4. 记时,室温中静置1h,观察血浆高度,以红细胞下沉的毫米数报告之。

    【 附     注 】

    1. 红细胞在单位时间内下沉的速度与血浆蛋白的量与质,血浆中脂类的量和质,红细胞的大小与数量,是否成串钱相聚以及血沉管的内径、清洁度、放置位置是否垂直,室温高低等因素都有关系。

    2. 标本采集时应空腹。

    3. 血液和抗凝剂的比例要准确。

    4. 血沉管内径要标准(2.5mm),放置要垂直。

    5. 做血沉的标本要在采集后3h 内测定,并充分混匀。

    6. 室温过低、过高和贫血时,对结果有影响。为此,血沉应尽量放在18~25℃室温下测定。室温过高时血沉加快,可以按温度系数校正。室温过低时血沉减慢,无法校正。 

网织红细胞计数

    【 标    本 】

    末梢血或抗凝静脉血。

    【 方    法 】

    百分计数法。

    【 试    剂 】

    10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液或10g/L煌焦油蓝ACD溶液。

    【 操    作 】

    1. 于小试管中滴加1滴煌焦油蓝生理盐水溶液或煌焦油蓝ACD溶液。

    2. 加入末梢血或静脉血2 滴于上述试管中,混匀。

    3. 静置15~20min 后,取用1 滴制成薄片。

    4. 油镜下检查1000个红细胞中网织红细胞数,以百分率或绝对值报告。

    【 附    注 】

    1. 活体染色时间不能过短,室温低时,放37℃温箱。

    2. 网织红细胞也可用Miller窥盘计数法、荧光染色或流式细胞仪计数。 

嗜碱性点彩红细胞计数

    【 标    本 】

    末梢血。

    【 方    法 】

    百分计数法。

    【 试    剂 】

    1. 甲醇;

    2. 碱性亚甲基蓝染液(保存2~3周)。

    【 操    作 】

    1. 按常法制成薄血片,自然干燥后,用甲醇固定3min。

    2. 用碱性亚甲基蓝染液染色1~2min,水洗待干。

    3. 用油镜计数1000个红细胞中嗜碱性点彩红细胞数,以百分率报告。

    【 附    注 】

    1. 用碱性亚甲基蓝染液染色后,红细胞呈浅蓝绿色,嗜碱性点彩呈深蓝色。

    2. 也可用瑞氏染色,嗜碱性点彩呈蓝黑色。

    3. 由于点彩红细胞分布不匀,必要时扩大计数红细胞数。

 

 红斑狼疮细胞检查

    【 标    本 】

    静脉血。

    【 方    法 】

    改良血块法。

    【 操    作 】

    1. 抽取患者血液2~3ml ,注于干燥试管内,于室温待凝。

    2. 于凝固刚形成时,用竹签将凝块搅碎,并将残余凝块除去。

    3. 2000r/分钟离心沉淀10分钟 ,使白细胞聚集在同一层面,以利于狼疮细胞形成。

    4. 37℃温箱内温育2h。

    5. 取出白细胞层及其上下各少许,置红细胞比积管中,以2000r/分钟离心,沉淀10分钟。

    6. 吸去上层液,轻轻吸取白细胞层,制成薄片3~4张。

    7. 以瑞氏染液染色、镜检。

    【 附    注 】

    1. 整个操作时间不能超过3h。

    2. 注意与果馅细胞鉴别。

一氧化碳血红蛋白定性试验

    【 标    本 】

    末梢血。

    【 试    剂 】

    50g/L  NaOH。

    【 操    作 】

    1. 取试管2支,各加蒸馏水3~5ml,一管加患者血液三滴,另一管加正常人对照血3滴,混匀。此时,如患者血中有一氧化碳,则血液呈樱桃红色。

    2. 每管各加50g/L  NaOH1滴,轻轻混合,正常对照管呈绿褐色,如患者血液中有一氧化碳血红蛋白,则溶血液仍呈樱桃红色,为阳性;如与正常对照色泽一致为阴性。

    【 附    注 】

    1. 观察结果须及时,否则樱桃红色逐渐退去,不易分辨。

    2. 本试验敏感性较差,血液中一氧化碳含量到一定程度时才显阳性。如患者事先已采取通气措施,血中一氧化碳含量下降,试验可阴性。但临床症状、体征仍可能存在。